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高效液相色譜的測量方式你沒聽過

點擊次數(shù):2470  更新時間:2020-12-08
  色譜柱的填料和流動相的組分應(yīng)按各品種項下的規(guī)定.常用的色譜柱填料有硅膠和化學(xué)鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠很常用辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用;離子交換填料用于離子交換色譜;凝膠或玻璃微球等,用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數(shù)微升。除另有規(guī)定外,柱溫為室溫,檢測器為紫外吸收檢測器。
  1.在用紫外吸收檢測器時,所用流動相應(yīng)符合紫外分光光度法項下對溶劑的要求。
  正文中各品種項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意改變外,其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組分的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等,均可適當(dāng)改變以適應(yīng)具體品種并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗的要求。一般色譜圖約于20分鐘內(nèi)記錄完畢。
  2.系統(tǒng)適用性試驗
  按各品種項下要求對儀器進(jìn)行適用性試驗,即用規(guī)定的對照品對儀器進(jìn)行試驗和調(diào)整,應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求;或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的小理論板數(shù)、分離度和拖尾因子.
  色譜柱的理論板數(shù) 在選定的條件下,注入供試品溶液或各品種項下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液,記錄色譜圖,量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時間t(R)和半高峰寬W(h/2),按n=5.54[t(R)╱W(h/2)]^2計算色譜柱的理論板數(shù),如果測得理論板數(shù)低于各品種項下規(guī)定的小理論板數(shù),應(yīng)改變色譜柱的某些條件(如柱長、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等),使理論板數(shù)達(dá)到要求。
  分離度 定量分析時,為便于準(zhǔn)確測量,要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。分離度(R)的計算公式為:R=2(tR2-tR1)/(W1+W2), 式中 t(R2)為相鄰兩峰中后一峰的保留時間; t(R1)為相鄰兩峰中前一峰的保留時間; W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。除另外有規(guī)定外,分離度應(yīng)大于1.5。
  拖尾因子
  為保證測量精度,特別當(dāng)采用峰高法測量時,應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子(T)是否符合各品種項下的規(guī)定或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計算公式為:
  W(0.05h) T=-2d1 式中 W(0.05h)為0.05峰高處的峰寬;
  d1為峰至大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外,T應(yīng)在0.95~1.05間。
  也可按各品種校正因子測定項下,配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對照品溶液,加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液,配成三種不同濃度的溶液,分別注樣3次,計算平均校正因子,其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。
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